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如何提高磁珠法自動(dòng)核酸提取的提取效率?

更新時(shí)間:2022-09-05點(diǎn)擊次數(shù):1506
現(xiàn)階段,常用的核酸提取法為離心柱純法和磁珠法等,但離心柱純化法效率低,步驟繁瑣。而由于檢測機(jī)構(gòu)每天需要處理大量樣本,大都是采用自動(dòng)化核酸提取儀配套磁珠法核酸提取試劑盒的方式進(jìn)行核酸提取步驟。應(yīng)用磁珠法的自動(dòng)核酸提取儀操作簡便,容易自動(dòng)化,是目前市場上的主流。
 
磁珠法——通過裂解液裂解細(xì)胞組織樣本,從樣本中游離出來的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面,蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中。利用磁棒吸附攜帶核酸的磁珠移動(dòng)至不同的試劑槽內(nèi),通過反復(fù)快速攪拌、混勻液體,經(jīng)過細(xì)胞裂解、核酸吸附、洗滌與洗脫等步驟,最終得到純凈的核酸。
  
如何提高核酸提取效率,可以嘗試以下方法:
 
一、磁珠品質(zhì)要好
 
首先,磁珠的四氧化三鐵核要能做到真正納米級(jí),100納米以下;其次,在納米四氧化三鐵表面包裹二氧化硅要均勻密封;三是表面羥基含量要豐富。這樣的磁珠比表面積大,磁響應(yīng)性能強(qiáng),與核酸的結(jié)合能力與釋放能力都強(qiáng)。
 
二、裂解液品質(zhì)好
 
對于提取胞內(nèi)核酸的應(yīng)用,我們需要對細(xì)胞進(jìn)行裂解,釋放核酸;當(dāng)裂解不充分時(shí),釋放的核酸有限,即使磁珠的吸附能力再強(qiáng),也很難獲得較高的得率。一般可以通過提高表面活性劑濃度,來增強(qiáng)裂解液的裂解能力,表面活性劑能夠破壞蛋白的結(jié)構(gòu),促進(jìn)膜蛋白的變性,使得細(xì)胞膜破裂而充分釋放出核酸。
 
三、洗脫要充分
 
洗脫不充分有時(shí)候我們裂解結(jié)合液各種條件優(yōu)化到了理想狀態(tài),可是核酸得率仍然很低。這種情況有可能是磁珠結(jié)合了核酸,但是由于洗脫不充分,磁珠結(jié)合的核酸沒有被洗脫下來。一般來說0.5mg的磁珠,洗脫液的體積為70-100ul。
 
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